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NEWS细胞周期检测原理与解读注意事项|人生就是博-尊龙凯时
来源:国文辰 日期:2025-02-26细胞功能 | 细胞周期结果解读及注意事项 细胞周期(Cell Cycle)是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。细胞周期在调控细胞正常生长和分裂中扮演着重要角色,对深入理解生物的生长发育和肿瘤生长控制具有重要意义。人生就是博-尊龙凯时将为您介绍细胞周期检测的原理、结果解读及实验中的注意事项,以帮助您更准确地分析细胞周期状态。
1. 细胞周期检测原理
细胞周期可分为分裂间期和有丝分裂期,而分裂间期又细分为休眠期(G0期)、DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2期)。
G0期:细胞处于静止或休眠状态,适当刺激下可重新进入细胞周期。
G1期:指有丝分裂到DNA复制前的一段时期,主要合成RNA与核糖体,细胞体积明显增大。
S期:DNA复制期,除了合成DNA外,还合成组蛋白及DNA复制所需的酶。
G2期:为有丝分裂的准备期,DNA合成终止,并大量合成RNA。
M期:细胞分裂。
2. 结果解读及重要参数
DipG1、DipG2、DipS分别代表G0/G1期、G2/M期和S期细胞在总细胞中的比例。
CV(变异系数):反映G0/G1峰的分辨率与精准度,是评估周期结果的重要参数。CV越小,结果质量越好,CV小于5%为优异,通常小于10%即可被接受。
RCS:表示模型与样本的拟合程度,通常在5以下为可接受范围。
G2/G1:反映G2/M期细胞和G0/G1期细胞DNA含量的倍数关系,一般在2左右,但会随染色浓度波动。
Debris与Aggregates:分别表示细胞碎片和黏连体的比例,这两者越低越好,建议尽量低于20%。
3. 实验注意事项
1) 确保样品获取足够事件:在细胞收集及用PBS清洗过程中可能导致细胞流失,建议每管细胞量在50万左右,有效细胞数不低于10000。
2) 单细胞悬液准备:操作要轻柔,以避免生成碎片,碎片过多会干扰S期计算。
3) 固定步骤:先加PBS后加无水乙醇,避免直接加70%-80%乙醇导致细胞成团。
4) RNA去除:某些染料(如PI)会与DNA和RNA结合,使用PI时需用RNase消除RNA影响。
5) 黏连体排除:黏连体的DNA含量与G2/M期相似,会干扰比例测定,应予以去除。
6) 细胞收集:应采用低速,以降低CV值。
7) 设定荧光通道为线性(lin)放大。
8) DNA染色后不应洗涤,以避免失去染料并降低荧光强度。
9) 定期质控仪器,以排除因设备设置引起的CV值变化。
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